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Analyse de fragments

L'analyse des fragments englobe une grande variété de techniques de génotypage, de profilage d'ADN et de détection de mutations pour la recherche médicale, environnementale et agricole.

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L'analyse des fragments est utilisée pour vérifier la taille des fragments amplifiés uniquement. L'amplification par PCR n'étant pas disponible via ce service, les produits de PCR marqués par fluorescence doivent être fournis sous forme d'échantillons d'analyse par microsatellite (VNTR)

L'analyse de fragments est une technique ayant un large éventail d'applications, notamment le génotypage, l'analyse des SNP et l'analyse de marqueurs microsatellites. Semblable au séquençage de Sanger, cette méthode est très précise et rentable, ce qui en fait une méthode fiable pour réaliser ses différentes applications. Il s'agit d'une technique qui incorpore des étiquettes fluorescentes avec PCR et électrophorèse capillaire. Ces marqueurs fluorescents sont appelés fluorophores et sont attachés à l'amorce qui amplifie l'extrémité 5'.

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Formulaire de synthèse peptidique

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Formulaire de synthèse génique

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Voici les étapes que nous suivons pour effectuer une analyse de fragments :

  1. Les amorces sont conçues de la manière habituelle, c'est-à-dire avec une amplification aux extrémités 3' et 5'. Cependant, une protéine fluorophore est attachée à l'extrémité 5'. Lors de la recherche de fragments de différentes tailles, des fluorophores de différentes couleurs sont utilisés pour chaque taille de fragment.
    Par exemple, un fluorophore bleu peut être utilisé pour amplifier des fragments de 300 pb, puis un fluorophore jaune peut être utilisé pour amplifier des fragments de 600 pb.
  2. L'extraction de l'ADN est ensuite effectuée sur l'échantillon qui vous intéresse, il est très important que cela soit bien fait car la qualité de l'échantillon peut affecter les résultats.
  3. La CR est réalisée à l'aide des amorces marquées au fluoropore et donnera des fragments de différentes tailles.
  4. Ces fragments sont ensuite séparés par électrophorèse capillaire où ils seront séparés en fonction de leur longueur, car les fragments plus petits se déplacent plus rapidement à travers la matrice.
  5. Une fois séparé, un laser est utilisé pour exciter le fluorophore fixé et la lumière réfléchie indique sa couleur. Cela nous donne ensuite les informations de taille et nous permet de distinguer les fragments.

Qu'est-ce que l'analyse de fragments ? Comment pouvez-vous en bénéficier ?

Il est essentiel de comprendre tous les aspects du séquençage pour vos projets. Maintenant, vous pouvez accéder à notre section Apprenez avec Macrogen Europe pour en savoir plus sur les sujets liés au séquençage.

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